一、檢測服務(wù)內(nèi)容
二、服務(wù)流程
客戶提交流式細(xì)胞檢測請求與實(shí)驗(yàn)要求，與公司商定具體的實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目、數(shù)量和費(fèi)用，雙方簽訂《委托流式細(xì)胞檢測服務(wù)合同書》；
客戶提供檢測樣品，我公司按照協(xié)定要求安排檢測項(xiàng)目預(yù)實(shí)驗(yàn)，雙方根據(jù)預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果商定實(shí)驗(yàn)技術(shù)參數(shù)細(xì)節(jié)；
公司實(shí)驗(yàn)室正式開展檢測實(shí)驗(yàn)，在規(guī)定時(shí)間內(nèi)向客戶提交實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和檢測報(bào)告。
三、樣品要求
客戶提供信息：1.提供抗體貨號及廠家 2.細(xì)胞信息 3.實(shí)驗(yàn)方案及具體要求
樣品寄送須知：細(xì)胞常溫, 生長良好，無污染，細(xì)胞數(shù)量＞106個(gè)；組織離體后制成單細(xì)胞懸液，加入PBS/培養(yǎng)基內(nèi)4℃運(yùn)輸；血液采集在EDTA/肝素鈉的采血管內(nèi)混勻，4℃運(yùn)輸。
四、交付標(biāo)準(zhǔn)
上機(jī)原始數(shù)據(jù)，高清散點(diǎn)圖直方圖密度圖等數(shù)據(jù)分析圖片，詳細(xì)檢測報(bào)告。
實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)分享
細(xì)胞抗原鑒定
實(shí)驗(yàn)原理：根據(jù)抗原-抗體反應(yīng)原理，檢測細(xì)胞表面或者胞內(nèi)抗原，對于同一樣品檢測不同種抗原，可以分為單標(biāo)、雙標(biāo)以及多標(biāo)。實(shí)驗(yàn)流程：離心去上清-調(diào)整細(xì)胞密度-固定穿膜-加入標(biāo)記抗體-孵育-離心去上清-重懸細(xì)胞-上機(jī)檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：
單染直方圖
單染散點(diǎn)圖
雙染散點(diǎn)圖
細(xì)胞凋亡檢測
實(shí)驗(yàn)原理：Annexin V選擇性結(jié)合磷脂酰絲氨酸(phosphatidylserine，簡稱PS)，是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的PS高親和力特異性結(jié)合。在正常細(xì)胞中， PS只分布在細(xì)胞膜脂質(zhì)雙層的內(nèi)側(cè)，而在細(xì)胞凋亡早期，細(xì)胞膜中的PS由脂膜內(nèi)側(cè)翻向外側(cè)。使用帶有綠色熒光FITC標(biāo)記的Annexin V，即Annexin V-FITC，則可通過流式細(xì)胞儀或熒光顯微鏡直接檢測到PS外翻這一細(xì)胞凋亡的重要特征。此方法被公認(rèn)為檢測細(xì)胞早期凋亡的靈敏指標(biāo)之一。實(shí)驗(yàn)流程：細(xì)胞培養(yǎng)-轉(zhuǎn)染或藥物處理-細(xì)胞收集- Annexin V-FITC/PI標(biāo)記-上機(jī)檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：
左下象限LL為活細(xì)胞；右下象限LR為早期凋亡細(xì)胞；右上象限UR為晚期凋亡細(xì)胞；左上象限UL為碎片及壞死細(xì)胞。
Annexin V-FITC（綠色）染色細(xì)胞為早期凋亡細(xì)胞；PI（紅色）染色細(xì)胞為壞死細(xì)胞；Annexin V-FITC/PI雙染細(xì)胞為晚凋或壞死細(xì)胞
細(xì)胞周期檢測
實(shí)驗(yàn)原理：碘化丙啶(Propidium，簡稱PI)是一種雙鏈DNA 的熒光染料，PI和雙鏈DNA 結(jié)合后可以產(chǎn)生熒光，并且熒光強(qiáng)度和雙鏈DNA 的含量成正比。細(xì)胞內(nèi)的DNA 被PI染色后，可使用流式細(xì)胞儀對細(xì)胞進(jìn)行DNA 含量測定，然后根據(jù)DNA 含量的分布情況進(jìn)行細(xì)胞周期分析。實(shí)驗(yàn)流程：細(xì)胞培養(yǎng)-轉(zhuǎn)染或藥物處理-細(xì)胞收集-細(xì)胞周期試劑盒-上機(jī)檢測。實(shí)驗(yàn)結(jié)果展示：
細(xì)胞周期擬合圖
線粒體膜電位檢測-JC-1
實(shí)驗(yàn)原理：線粒體膜電位的下降是細(xì)胞凋亡早期的一個(gè)標(biāo)志性事件。JC-1是一種理想的用于檢測線粒體膜電位的熒光探針，可以檢測細(xì)胞、組織或純化的線粒體膜電位。其原理是，當(dāng)線粒體膜電位較高時(shí)，JC-1聚集在線粒體基質(zhì)中，形成聚合物，488nm激發(fā)時(shí)的最大發(fā)射波長為590nm，可以產(chǎn)生紅色熒光，在流式上表現(xiàn)為FL1和FL2雙陽性;當(dāng)線粒體膜電位較低時(shí)，JC-1不能聚集在線粒體基質(zhì)中，此時(shí)JC-1為單體，488nm激發(fā)時(shí)最大發(fā)射波長為527nm，可以產(chǎn)生綠色熒光，形成流式圖匯總所有細(xì)胞FL1為陽性。凋亡細(xì)胞則大多為FL1單陽性。不同熒光顏色的轉(zhuǎn)變反應(yīng)線粒體膜電位的變化，常用紅綠熒光的相對比例衡量線粒體去極化的比例。實(shí)驗(yàn)流程：細(xì)胞離心去上清-調(diào)整細(xì)胞密度-裝載探針-孵育探針-上機(jī)檢測。
