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發(fā)表者：北京博奧森生物      發(fā)表時(shí)間：2019-8-12

免疫分型（immunophenotyping）是指根據(jù)存在于細(xì)胞表面、核或細(xì)胞質(zhì)中的標(biāo)記物或抗原的類型，利用基于抗體的對異質(zhì)細(xì)胞群進(jìn)行分析，以鑒定多種目標(biāo)細(xì)胞群的存在及比例。通過使用特異性識別不同細(xì)胞類型標(biāo)記物或抗原的抗體，從而幫助鑒定細(xì)胞的譜系。例如腫瘤標(biāo)志物的檢測、浸潤免疫細(xì)胞的分析、白血病的診斷等。免疫分型可以利用組織切片(新鮮或固定組織)通過免疫組化方法以及利用細(xì)胞懸液通過流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行分析。

流式細(xì)胞術(shù)可以說是用于探測人類免疫表型的首選技術(shù)，特別是由于它可以在諸如血液的復(fù)雜混合物中通過測量許多單個(gè)細(xì)胞上的多個(gè)參數(shù)，從而鑒定和分析包括稀有亞群在內(nèi)的許多細(xì)胞亞群。并且由于可用的抗體試劑的擴(kuò)大和實(shí)驗(yàn)方案的不斷調(diào)整，流式細(xì)胞術(shù)不僅可用于評估細(xì)胞表面蛋白的表達(dá)，還可以用于評估胞內(nèi)蛋白的表達(dá)或修飾水平以及細(xì)胞因子的水平。

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使用細(xì)胞表面標(biāo)記的特定組合對免疫細(xì)胞亞群進(jìn)行定義是一個(gè)不斷發(fā)展的過程，特別是那些高頻研究的細(xì)胞類型。這些類型包括調(diào)節(jié)性T細(xì)胞(Treg)、分泌IL-17的T輔助細(xì)胞(Th17)、樹突狀細(xì)胞(DC)和自然殺傷細(xì)胞(NK)。盡管新標(biāo)記的發(fā)現(xiàn)和新的細(xì)胞子集將在未來一段時(shí)間內(nèi)持續(xù)下去，然而，我們還是希望細(xì)胞免疫學(xué)領(lǐng)域具有足夠的成熟程度，以達(dá)到對大多數(shù)共同研究的免疫細(xì)胞亞群的定義達(dá)成共識。換句話說，應(yīng)當(dāng)能夠定義一種相對穩(wěn)定的標(biāo)記集合，其描繪T細(xì)胞、B細(xì)胞、NK細(xì)胞、單核細(xì)胞和DC細(xì)胞等主要類型。因此，我們通過總結(jié)文獻(xiàn)確定各個(gè)細(xì)胞類型的關(guān)鍵分化標(biāo)記，并且總結(jié)目前用于人體免疫監(jiān)測的標(biāo)準(zhǔn)化免疫表型分型組合。

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T細(xì)胞

T淋巴細(xì)胞可在CD3表達(dá)的基礎(chǔ)上被免疫表型化，隨后進(jìn)一步細(xì)分(如CD8+殺傷性T細(xì)胞和CD4+輔助性T細(xì)胞)。此外，T細(xì)胞表型是靈活的，可以隨不同的微環(huán)境發(fā)生變化；表型也可能重疊在多個(gè)T細(xì)胞群體之間。此外，T細(xì)胞亞群的分類還可能是根據(jù)響應(yīng)某些刺激或磷酸化免疫信號蛋白（如STAT蛋白）而分泌的特定細(xì)胞因子水平來確定。

殺傷性T細(xì)胞(又被稱作細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞，CD8+)能識別抗原，這些抗原是由感染因子釋放的，并與宿主細(xì)胞結(jié)合。殺傷性T細(xì)胞能夠識別多種細(xì)胞類型和病原體并與之相互作用。T細(xì)胞受體與外源抗原結(jié)合，觸發(fā)細(xì)胞毒素向受感染細(xì)胞釋放，導(dǎo)致細(xì)胞死亡。殺傷性T細(xì)胞的主要鑒定標(biāo)志物就是CD8+，但是如果需要根據(jù)不同生理狀態(tài)下對殺傷性T細(xì)胞進(jìn)行功能鑒定，還可以進(jìn)一步增加其他標(biāo)志物形成標(biāo)志物組合。比如，對殺傷性T細(xì)胞進(jìn)一步定義幼稚、中央記憶性、效應(yīng)記憶性和效應(yīng)T細(xì)胞亞群的經(jīng)典標(biāo)志物是基于趨化因子受體7(CCR7；也稱為CD197)和CD45RA（或CD45RO）的表達(dá)情況；對殺傷性T細(xì)胞進(jìn)一步分析其活化狀態(tài)是基于HLA-DR和CD38的表達(dá)情況^1-3。

輔助性T細(xì)胞(即Th1、Th2、Th9、Th17和Tfh細(xì)胞等)具有很少的細(xì)胞毒性活性并且分泌對其它白細(xì)胞(例如B細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞或中性粒細(xì)胞)起作用以清除病原體的細(xì)胞因子。除了CD4這一共有標(biāo)志物，不同輔助性T細(xì)胞還有各自的常用鑒定標(biāo)志物組合，如下圖所示：

調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（即Treg）在維持免疫穩(wěn)態(tài)中起著重要作用，并且也與許多自身免疫性疾病有關(guān)⁴。迄今為止，已確定了兩種主要類別的CD4+Treg：組成型表達(dá)CD25和FoxP3的天然Tregs(nTreg)以及誘導(dǎo)后激活表達(dá)CD25和FoxP3的誘導(dǎo)型Tregs(iTreg)⁵。人和小鼠Treg的CD25表達(dá)情況不同。在小鼠中，所有CD25+細(xì)胞都被認(rèn)為是Treg；而在人的免疫系統(tǒng)，只有那些高水平表達(dá)CD25的細(xì)胞被認(rèn)為是Treg⁶。

iTreg來源于胸腺，在某些抗原和專門的免疫調(diào)節(jié)細(xì)胞因子（如TGF-1、IL-10和IL-2）的刺激下，由單陽性CD4細(xì)胞分化為表達(dá)CD25和Foxp3的Tregs⁶。還報(bào)告了iTreg群體具有一定的可塑性，可以轉(zhuǎn)化為其他T細(xì)胞亞型，例如Th1和Th17細(xì)胞⁶。

目前，F(xiàn)OXP3是Treg的最明確的標(biāo)記，盡管有報(bào)道發(fā)現(xiàn)少數(shù)Treg亞群是FOXP3-⁷。轉(zhuǎn)錄因子Foxp3作為Tregs的標(biāo)志又進(jìn)一步推動了其他的Treg標(biāo)記的發(fā)現(xiàn)，包括CD127。若干已發(fā)表的報(bào)告證明CD127表達(dá)與Foxp3呈負(fù)相關(guān)⁸。比如，利用CD4+、CD25+和CD127-組合分選策略，可用于獲得體外可擴(kuò)增的Treg細(xì)胞。

Bioss具有豐富的T細(xì)胞分型相關(guān)產(chǎn)品，代表產(chǎn)品如下：

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